小鼠肝脏原代细胞肝窦e5a48de588b6e799bee5baa631333363353832内皮细胞的怎么培养

肝脏是人体中最大的实质性器官，主要负责着体内脂类、糖类、蛋白质、和维生素等众多物质的代谢，是人体中的代谢工厂。此外，肝脏在体内还发挥着解毒、免疫、存储糖原和维生素、合成胆汁以及造血等功能，被称之为体内最繁忙的器官。肝脏的复杂功能的发挥依赖于组成肝脏的各种类型的细胞，肝脏细胞主要分成两类：肝实质细胞（HC）和非实质细胞（NPC）。前者是肝脏中最主要的细胞类型，占据肝脏体积约80%，发挥着肝脏中的绝大部分功能。非实质细胞主要包括肝窦内皮细胞（LSEC）、枯否细胞（KC）、肝星状细胞（HSC）以及其他一些免疫细胞等。目前，对肝脏细胞的研究往往集中于某一种类型的细胞。本研究同时构建了多种类型细胞的基因表达谱，通过肝脏细胞水平表达谱的全面解析，系统地发现肝脏细胞中表达的新基因或新亚型，深入地了解肝脏不同类型细胞的共性与特性，全新地认识细胞在肝脏器官中的分工与协作。转录组和蛋白质组作为基因组后继补充研究对象，分别担当传递遗传信息和功能最终执行的角色。而蛋白质组鉴定覆盖度的范围往往是参照编码基因的数目，因此可寻求转录组水平的mRNA鉴定辅助蛋白质组的深度覆盖。除了覆盖度的优势以外，转录组水平在灵敏度和准确性方面具有无可比拟的优势，还可以更精确地鉴定到基因的可变剪接、RNA编辑等信息。目前，转录组测序（RNA-Seq）作为一项新一代测序技术，能在全基因组范围内以单碱基分辨率检测并定量转录片段，成为研究转录组表达谱的重要方法。首先，我们首次构建了肝脏细胞水平的转录组表达谱。以C57BL/6小鼠动物为模型，采用流式细胞术完成肝脏3种类型细胞（HC、LSEC和KC）的分选，确保各类细胞纯度和活性分别达到95%和85%以上。对细胞提取的RNA，利用新一代测序RNA-Seq技术，每种类型细胞得到3G以上的数据量，满足深度测序目的。